導(dǎo) 語：

RNAscope是一種新型 RNA原位雜交技術(shù)，基于其獨(dú)特的探針設(shè)計(jì)與背景抑制技術(shù)，并且融合傳統(tǒng)RNA原位雜交技術(shù)與FISH技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，使單個(gè)RNA的轉(zhuǎn)錄變得可視化，是目前最精準(zhǔn)的RNA檢測技術(shù)。

技術(shù)介紹：

RNAscope?是一項(xiàng)用于檢測位于完整細(xì)胞中目標(biāo)RNA的定量原位雜交（in situ hybridization , ISH) 的新技術(shù)。該技術(shù)以其能放大特異性信號(hào)而非噪音信號(hào)的專利探針引物設(shè)計(jì)方法，代表了RNA原位雜交（ISH）領(lǐng)域一項(xiàng)重大進(jìn)步。

RNAscope? 探針引物設(shè)計(jì)與信號(hào)放大原理

為了能夠顯著提高RNA原位雜交ISH的信號(hào)噪聲比，RNAscope?采用了一項(xiàng)原理已被證實(shí)的十分類似于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的設(shè)計(jì)原理。兩個(gè)獨(dú)立的引物探針 (Z形引物對) 需要隨機(jī)與目標(biāo)序列互補(bǔ)結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大。因?yàn)閮蓚€(gè)獨(dú)立引物相互緊挨同時(shí)相互互補(bǔ)結(jié)合到一個(gè)非目標(biāo)序列的可能性非常之小，這種設(shè)計(jì)原理保障了對目標(biāo)信號(hào)的特異性放大。

對于任意一個(gè)目標(biāo)RNA序列，都有一組獨(dú)特設(shè)計(jì)的20對Z形引物探針對只針對該目標(biāo)序列具有互補(bǔ)雜交特異性，而不會(huì)結(jié)合到非目標(biāo)片段上。

RNAscope?引物探針設(shè)計(jì)與信號(hào)放大系統(tǒng)的優(yōu)勢

靈敏度：每三對Z形引物對足以實(shí)現(xiàn)對于單一RNA分子的檢測。在部分RNA段落不能被有效抵達(dá)或者RNA部分降解等情況下，20對Z形引物對的設(shè)計(jì)保障了足夠強(qiáng)勁的RNA檢測。

特異性：Z形引物對的設(shè)計(jì)屏蔽了背景噪音。單一的Z形引物探針對于非目標(biāo)序列的結(jié)合不能夠提供信號(hào)放大前體序列結(jié)合所需要的足夠長度，以此防止了對于非特異信號(hào)的擴(kuò)增，保障了特異性。

單分子量級(jí)的可視性與定量分析： 此20x20x20x的引物設(shè)計(jì)與信號(hào)放大原理讓單一RNA分子能夠在標(biāo)準(zhǔn)的顯微鏡下以一個(gè)點(diǎn)狀信號(hào)的方式可視化呈現(xiàn)。

能夠檢測到降解了的RNA： 得益于其相對短小的目標(biāo)結(jié)合區(qū)域(Z形引物對底端40到50個(gè)堿基的長度)，此Z形引物對的設(shè)計(jì)為檢測到部分降解的RNA提供了保障。

實(shí)驗(yàn)方案可在6.5至8小時(shí)內(nèi)完成，時(shí)間長短取決于不同的RNAscope?實(shí)驗(yàn)方法。手工染色步驟只需要2至2.5小時(shí)的操作時(shí)間，更快速的完成檢測實(shí)驗(yàn)。

每個(gè)點(diǎn)狀信號(hào)代表一個(gè)目的RNA分子，可在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下觀察。通過RNAscope?SpotStudio?軟件進(jìn)行手工計(jì)算或自動(dòng)圖像分析，對單個(gè)細(xì)胞中的信號(hào)進(jìn)行定量分析。

RNAscope? 技術(shù)案例視頻

RNAscope? 技術(shù)檢測長鏈非編碼RNA（lncRNA）

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